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计数及浓度标准微球的混匀问题

随着越来越多的研究涉及到细胞计数,计数微球的使用变得也越来越普遍,现就相关的混匀问题作简单介绍。

重悬和混匀
计数/浓度标准微球可用于细胞计数仪的校准。 在仪器的验证、常规 QC 检查和校正以及人员培训方面都需要用到。校准微球的使用,可以标准化仪器之间,实验室之间的检测条件。


高分子微球因为均一性好,重复性佳,便宜且易于获得,常用于模拟生物颗粒,如细胞,蛋白多聚体等。虽然这类非生物性颗粒的有许多优点,但在具体操作时,仍有许多地方需要注意。

正确的重悬/混匀,取样是仪器校正结果精准可信的重要保证。不适当的混匀或取样会产生双重后果:1) 取的样品无法准确代表原装瓶中的浓度,2)原装瓶中微球因混匀不足及多次采样产生浓度迁移,累积误差。

重悬/混匀: 使用前在旋转混匀仪上混合30分钟,然后马上进行取样。如果是小瓶包装(如SingleShot™),体积小,只需要几秒钟的剧烈摇晃就可以了。产品经过长时间的存放后,可能会有颗粒沉淀(常用的聚苯乙烯密度1.05),此时需要更长时间的混匀,如有必要,还需要超声等。

取样:对于计数/浓度校准,取样体积的误差会影响到校正的结果。为了保证取样的正确,需要对移液器进行日常维护,并定期校准,而且还要对操作人员进行必要的取样培训。

 正如上面所说,由于球的密度大于纯水,加上微球的体积较大>2um, 因此长时间存放会导致微球沉降,另外,不正确的存放还可能会让微球留驻在瓶盖上,引起浓度误差。为了获得精准的校正结果,使用时以上这些都需充分考虑。

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