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微球吸附,偶联中的问题简答
时间:2016-08-02 15:18:23

问题

解决办法

 

 

拆包装前,看到微球有聚集

温和超声,这种情况一般不会出现,如果出现请联系厂家退(换)货

操作过程中出现聚集

聚集分解

EDC后出现聚集

缓慢加EDC, 边加边晃动微球, 降低微球浓度,降EDC

加戊二醛后出现聚集

缓慢加戊二醛, 边加边晃动微球, 降低微球浓度;加多一点戊二醛,可以减少微球间的交联。

加蛋白后聚集

增加蛋白浓度

洗涤后不易分散

加乳化剂或是减少洗涤次数

吸附率低

pH调节至蛋白等电点附近

偶联结果总是变化, 不稳定

可能试剂受污染或过期,更换新试剂

偶联,无反应

优化缓冲液pH尽可能离等电点远一点

离心效果不好

用过滤,透析等方式替代离心

非特异性吸附

用其它的封闭剂 如甘氨酸,明胶

小分子肽结合了,但没反应

SAV-Biotin系统或是用表面C臂、PEG修饰的球

长期保存过程中,蛋白有脱落

共价偶联或是将成品做成冻干粉

张黔松
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