AHARIBO 新生肽及RNA分析

AHARIBO是Immagina公司开发的对活性核糖体上的新生肽，及mRNA进行平行分析的技术。其命名源于叠氮丙胺酸(azidohomoalanine, AHA)及核糖体Ribosome。AHA是甲硫胺酸（Met)的类似物，可以扮演Met的角色，参与肽合成。

在培养基中，用AHA替代Met, 对细胞进行培养，可以人为地将AHA掺入到新合成的肽段中,然后再添加翻译阻断剂sBlock （sBlock是Immagina公司是一众阻断物中筛选出的专利产品）。由于AHA上有叠氮基，可以与DBCO（二苯并环辛炔）发生加成环-烃反应，生成稳定的三唑环，我们可以用DBCO修饰的磁珠与细胞共孵育，此时DBCO与新生肽上的AHA反生点击化学反应（click reaction)，将磁珠与新生肽结合在一起：形成磁珠-新生肽-核糖体复合物。再通过磁分离方法，就可以将处于翻译中的核糖体纯化出来。

DBCO修饰的磁珠与AHA上的叠氮基发生点击化学反应

由于只有正处于翻译中的核糖体才有可能掺入AHA，这样就保证了，我们拉下来的是处于翻译状态下的活性核糖体（Active Ribosome)。我们知道，一条mRNA可以结合多个核糖体，因此，我们得到是多聚核糖体（Polyribosomes)，而不是像Ribolace一样，经RNA酶处理后的单个active ribosome。

AHARIBO 分析流程

新合成蛋白肽与RNA的平行分析，可以真实反应mRNA与新合成蛋白之间的关系，相对于单纯的mRNA 或是新生肽分析，更具说服力。

<p style="-webkit-tap-highlight-color: rgba(0, 0, 0, 0); margin: 0px 0px 24px; padding: 0px; outline: 0px; max-width: 100%; clear: both; min-height: 1em; color: rgba(0, 0, 0, 0.9); font-family: " pingfang="" sc",="" system-ui,="" -apple-system,="" blinkmacsystemfont,="" "helvetica="" neue",="" "hiragino="" sans="" gb",="" "microsoft="" yahei="" ui",="" yahei",="" arial,="" sans-serif;="" font-size:="" 17px;="" letter-spacing:="" 0.544px;="" text-align:="" justify;="" box-sizing:="" border-box="" !important;="" overflow-wrap:="" break-word="" !important;"="">AHARIBO 可以 AHARIBO RNA及AHARIBO Protein kit分别提供，前者分析RNA，后者分析新生肽，也可以将两种分析合成一个kit提供。AHARIBO在经过不断的优化后，虽然原理没有改变，但其所用的磁珠在上述两种试剂盒中是不同的。