流式厂家或是具体的流式操作人员经常会用到Spherotech的彩虹微球(Rainbow)以及超级彩虹微球(Ultra Rainbow)进行流式仪器的日常校准。Rainbow及Ultra Rainbow两系列的质控球加起来有数十种之多,那么面对具体的场景,我们该如何选择?
首先我们来看看两种球有什么异同。两种球都是内染了多种荧光素的质控微球。Rainbow球的荧光素主要覆盖可见光区(365-650 nm),适用的是普通的流式细胞仪。Ultra Rainbow球掺入的荧光素种类更多,覆盖了紫外到远红外区(UV--Far Red),针对的是高端的流式细胞仪如多激光全光谱型的流式。
其次我们再来熟悉两个词:Alignment 和 Calibrationis 。Alignment(对准)是对激光器性能的追踪,也就是检测激光器是不是随时间推移也失去对准,或者是激光器是不是老化,发光的功率或是强度已经减弱。 Calibration(校准)涉及仪器在整个开放阅读框动态范围内的读数能力、区分不同群体的能力,以及仪器在该范围内的读数准确性。具体表现就是对通道的线性和灵敏度进行质控。
另外,我们也简单解释一下单峰和多峰。单峰是指每种荧光只有1个峰强,假如Rainbow用了x种荧光素染一群组球,那么其中某一个荧光素只有一个强度峰,如果用K种浓度的x种荧光素染了K群组的球,那么就是K个峰了。由此可见,我们常说的几峰球,是针对其中的一个荧光素而言,而与用了多少种荧光素无关。
最后,我们来看看如何选择。如果是Alignment-光路的质控,因为不涉及到性线,所以用单峰球就可以了。普通的流式细胞仪用RFP颗粒,如RFP-30-5A就可以了。如果您的仪器是全光谱多激光的,涉及的荧光光谱更广,则需要用URFP颗粒,如URFP-30-2,这个也是大家最喜欢的。Calibration--通道灵敏度及性线的质控,因为涉及到线性,所以要多峰球,峰越多峰好(跟我们建标曲一样,3点没有3点好)。而且这些峰最好能覆盖从弱到强的荧光范围,增加其灵敏度。对于普通的流式仪器,我们建议选RCP-30-5A(8峰球),对于高端的全光谱型流式,或是用户对质控要求高的,我们可以选URCP-100-2H(9峰),它有最大峰数,能全面验证灵敏度与分辨率。有的客户可能仅是为了紫外及红外信号弱的问题,要求不是很高,那可以选择6峰的,如URCP-38-2K就可以了。