纳米流式的质控微球

纳米流式细胞术(nano flow cytometry)是最近兴起的一项尖端技术，它结合流式细胞术原理与纳米技术，能够以极高的精度和灵敏度分析和表征纳米颗粒、外泌体 (EV) 和其他小颗粒。在生物研究领域，应用最多的还是针对外泌体进行。

由于检测对像的粒径小，因此其质控球也要跟着变小。对于粒径的质控很容易，只要选择小粒径的非荧光标准聚苯乙烯球就可以了，如NIST级别的聚本乙烯球(如Beckman的CytoFLEX nano QC Scatterspheres，nanoViS Nanoscale Sizing Standards beads）。对于光学系统及流体系统性能的验证（Alingment)和通道灵敏度的校准（Calibration)，因涉及到荧光，就会有点麻烦。

粒径变小会带来一个问题，就是如何在如此小球体内（<300nm）染（装）上荧光物质，如果是单色荧光，单个强度，还好办一些，如Bangslabs的Nanobead Calibration Kit（50nm, 100nm) #832就只染了常见的488/520nm绿色荧光。如果要制备成多种荧光多个峰（峰），就有难度了。Spherotech退其次，研制了Ultra Rainbow Fluorescent Particles #URFP-02-2（200nm)，多种荧光一个峰（每种荧光一种强度），能覆盖几乎所有的通道；类似的还有Beckman的CytoFLEX nano QC Fluorospheres，不过它采用更大的直径：500nm；Poly-An公司生产的多荧光单峰，其直径更小（125nm），更接近EV，可以在 365–650 nm 之间的任何波长下被激发，并在 400–750 nm 下发射，这使得它们可以在所有常见的荧光检测通道（DAPI、FITC、PE/TAMRA/Cy3®、APC/Cy5®、Cy7®）中进行检测，且仅有极小的光漂白。

国内的福流生物生产的是单荧光（488/520）多强度（5峰），其直径为250nm。是不是就没有像spherotech那种多荧光多峰的calibration beads(常说的8峰球）?有的，Beckman的CytoFLEX nano Multi-intensity Fluorospheres 就是这类球，其直径是500nm，稍大了一些。

Spherotech，Bangslabs和Beckman的质控球，都是聚苯乙烯材质，悬浮性好，染料也容易，但自发荧光较高。福流生物用的是硅微球，它的密度为2， 容易沉，但它的折射率比较接近生物囊泡。PolyAn用的是PMMA，的折射率 (RI) 较低，接近 EV 的 RI，因此比聚苯乙烯颗粒更具优势，另外它的密度为1.18，比硅微球的悬浮性也要好一些。

汉诺生物是Spherotech，Bangslabs及PolyAn指定的中国代理，如果您对纳米流式的质控球感兴趣，请联系我们。